CellTiter 96® AQ_ueous One Solution Cell Proliferation Assay (MTS)

Il saggio di proliferazione cellulare CellTiter 96® _AQueous One Solution è un metodo colorimetrico per determinare il numero di cellule vitali in saggi di proliferazione, citotossicità o chemiosensibilità. Il reagente CellTiter 96® _AQueous One Solution contiene un composto di tetrazolio [3-(4,5-dimetiltiazolo-2-il)-5-(3-carbossimetossifenile)-2-(4-solfofenile)-2H-tetrazolio, sale interno; MTS] e un reagente per l'accoppiamento degli elettroni (fenazina etosolfato; PES). Il PES ha una maggiore stabilità chimica, che consente di combinarlo con l'MTS per formare una soluzione stabile.

I test vengono eseguiti aggiungendo una piccola quantità del reagente CellTiter 96® _AQueous One Solution direttamente ai pozzetti di coltura, incubando per 1–4 ore e registrando poi l'assorbanza a 490 nm con un lettore di piastre a 96 pozzetti. La quantità di prodotto formazan, misurata dalla quantità di assorbanza a 490 nm, è direttamente proporzionale al numero di cellule vive in coltura.

Se attualmente si utilizza un saggio di incorporazione di^[3H]-timidina, l'aggiunta di CellTiter 96® _AQueous One Solution Reagent può essere sostituita all'impulso di^[3H]-timidina nel momento del saggio in cui viene solitamente aggiunto l'impulso di timidina radioattiva. I dati di precedenti biotest che confrontano l'incorporazione di^[3H]-timidina con il saggio CellTiter 96® _AQueous basato su MTS e con il saggio originale CellTiter 96® basato su MTT dimostrano che i reagenti di tetrazolio possono essere sostituiti dall'incorporazione di^[3H]-timidina.

Caratteristiche e vantaggi

Il semplice formato "add-incubate-measure" (aggiunta di reagenti in un'unica fase) consente di progettare saggi di screening omogenei ad alta produttività. A differenza della MTT, il saggio può essere utilizzato come soluzione singola e viene filtrato e sterilizzato, pronto per essere aggiunto alle piastre di saggio. Sono necessari meno passaggi, poiché il saggio può essere eseguito in piastre da 96 pozzetti senza fasi di lavaggio o di raccolta delle cellule. Inoltre, le fasi di solubilizzazione normalmente richieste per i test MTT sono eliminate.

Il saggio offre flessibilità, in quanto le piastre possono essere lette e rimesse in incubatore per un ulteriore sviluppo del colore; inoltre, grazie all'eliminazione del solvente organico volatile per solubilizzare il prodotto formazan e dei reagenti radioattivi normalmente richiesti da saggi simili, il saggio di proliferazione cellulare CellTiter 96® _AQueous One Solution è più sicuro da usare.