Caspase-Glo® 9 Assay Systems

Il Caspase-Glo® 9 Assay è un test luminescente omogeneo che misura l'attività della caspasi-9. Il saggio fornisce un substrato proluminogenico della caspasi-9 in un sistema tampone ottimizzato per l'attività della caspasi, l'attività della luciferasi e la lisi cellulare. L'aggiunta di un singolo reagente Caspase-Glo® 9 in un formato "add-mix-read" determina la lisi cellulare, seguita dalla scissione del substrato da parte della caspasi e dalla generazione di un segnale luminescente di tipo "glow". Il segnale generato è proporzionale alla quantità di attività caspasica presente. Il reagente Caspase-Glo® si basa sulle proprietà di una luciferasi termostabile proprietaria (Ultra-Glo™ Recombinant Luciferase), che genera un segnale luminescente stabile di tipo "glow" e migliora le prestazioni in un'ampia gamma di condizioni di analisi.

Il sistema include ora una fiala separata di inibitore della proteasi, MG-132 Inhibitor, che può essere utilizzata per ridurre il background, migliorando così le prestazioni del test Caspase-Glo® 9 nelle applicazioni basate su cellule.

Caratteristiche e vantaggi

• Il protocollo omogeneo "add-mix-read" rende il test facile da automatizzare; è sufficiente aggiungere un volume uguale di reagente al volume del campione.

• La bassa luminescenza di fondo consente di ottenere un eccellente rapporto segnale/rumore e una sensibilità superiore non ottenuta da altri formati di caspasi, consentendo di eseguire i test nei formati a 96 o 384 pozzetti.

• Non è richiesta alcuna preparazione o manipolazione del campione e non sono necessari tempi di incubazione prolungati come per i test basati sulla fluorescenza. La massima sensibilità si ottiene in appena 0,5-1 ora.

• Il saggio fornisce eccellenti fattori Z´ in modelli cellulari e di enzimi purificati.

• Il saggio Caspase-Glo® 9 utilizza un substrato luminogenico contenente la sequenza LEHD, che ha dimostrato di essere selettiva per la caspasi-9. Il saggio include un'analisi opzionale della proteasi. Il saggio include un inibitore opzionale del proteasoma (MG-132) che, aggiunto al reagente Caspase-Glo® 9, riduce significativamente il background aspecifico nei saggi basati sulle cellule.

• Multiplex con altri saggi cellulari di Promega.

Le applicazioni comprendono la determinazione dell'attività della caspasi-9, la determinazione dell'inibizione della caspasi-9 (_IC50) e la determinazione dell'attivazione della caspasi-9 (_EC50).

Note: Utilizzando 100μl di Reagente Caspase-Glo® per test in un formato a 96 pozzetti, la Cat.# G8210 contiene reagenti sufficienti per 25 test; la Cat.# G8211, 100 test; la Cat.# G8212, 1.000 test, rispettivamente. Utilizzando 25μl di Reagente Caspase-Glo® per test in un formato a 384 pozzetti, il Cat.# G8210 contiene reagenti sufficienti per 100 test; Cat.# G8211, 400 test; Cat.# G8212, 4.000 test, rispettivamente.