Saggi del percorso RAS-RAF

La via RAS-RAF-MAPK svolge un ruolo centrale nella regolazione della crescita, della sopravvivenza e della differenziazione delle cellule. Diversi tumori possono presentare anomalie in questa via, rendendola un importante bersaglio per le terapie oncologiche. I farmaci che inibiscono i componenti della via RAS-RAF - inibitori di BRAF, MEK ed ERK - hanno dimostrato efficacia nel trattamento di tumori maligni con specifiche alterazioni genetiche. Più di recente, il KRAS, che in precedenza si pensava fosse "indistruttibile", ha dimostrato di essere un bersaglio valido per lo sviluppo di farmaci con la scoperta di inibitori per il KRAS(G12C). Sono in fase di sviluppo anche farmaci mirati ad altre mutazioni hotspot del KRAS. Tuttavia, l'efficacia di questi farmaci iniziali può essere limitata dallo sviluppo di resistenza. Sono necessarie ulteriori ricerche su questa via per comprendere meglio i meccanismi molecolari che la regolano e identificare nuove strategie che possano colpire efficacemente la via RAS-RAF.

I metodi per interrogare la via RAS-RAF si presentano sotto diverse forme. L'aggancio diretto dei composti ai bersagli della via RAS-RAF può essere quantificato in cellule vive utilizzando i test NanoBRET® Target Engagement Assays. I componenti della via RAS-RAF spesso formano complessi proteici per iniziare o in risposta all'attivazione della via. I saggi di interazione proteina:proteina possono misurare l'effetto dei composti sulla formazione di complessi proteici chiave nella via RAS-RAF in cellule vive o tra proteine purificate. Poiché la cascata di segnalazione della via è mediata da chinasi, i saggi di attività delle chinasi, come l'ADP-Glo™ Kinase Assay, possono essere utilizzati per selezionare e caratterizzare gli inibitori in saggi biochimici che utilizzano chinasi purificate. L'attività cellulare delle chinasi può essere valutata rilevando la fosforilazione dei substrati della chinasi mediante immunodosaggi, come il Lumit™ Immunoassay Cellular Systems.