ROS-Glo™ H2O2 Assay
Specific, Direct Detection of Hydrogen Peroxide (H<sub>2</sub>O<sub>2</sub>)
- Fast assay involves a simple two-reagent-addition protocol
- Substrate reacts directly with H2O2; no need for HRP as a coupling enzyme
Catalog Number:
Size
Catalog Number: G8820
Catalog Number: G8821
Il ROS-Glo™ H₂O₂ Assay è un test bioluminescente omogeneo, rapido e sensibile che misura il livello di perossido di idrogeno (H₂O₂), una specie reattiva dell'ossigeno (ROS), direttamente in coltura cellulare o in reazioni enzimatiche definite. Un substrato di luciferina derivatizzato viene incubato con il campione e reagisce direttamente con H₂O₂ per generare un precursore di luciferina. L'aggiunta della soluzione di rivelazione ROS-Glo™ converte il precursore in luciferina e fornisce la luciferasi ricombinante Ultra-Glo™ per produrre un segnale luminoso proporzionale al livello di H₂O₂ presente nel campione.
Chimica del ROS-Glo™ H₂O₂ Assay
Il substrato H₂O₂ reagisce direttamente con H₂O₂ per creare il precursore della luciferina. La soluzione di rilevamento ROS-Glo™ Substrate converte il precursore di luciferina in luciferina e fornisce anche la luciferasi Ultra-Glo™ per produrre luce. Il segnale luminoso è proporzionale alla quantità di H₂O₂ nel pozzetto del campione.
Panoramica del protocollo di analisi ROS-Glo™ H₂O₂ per la rilevazione cellulare o biochimica
Il test segue un semplice protocollo di aggiunta di due reagenti che non richiede la manipolazione del campione. Il substrato ROS-Glo™ H₂O₂ può essere aggiunto ai pozzetti del saggio con il trattamento o alla fine del periodo di incubazione del trattamento e i dati possono essere registrati in meno di 2 ore dall'aggiunta del reagente.
Esecuzione di saggi enzimatici o basati su cellule in formati di piastre a 96 e 384 pozzetti
Induzione di ROS in cellule coltivate
Il trattamento con menadione delle cellule K562 ha determinato un aumento dei ROS dipendente dalla concentrazione, rilevato con il ROS-Glo™ H₂O₂ Assay. Il saggio può essere eseguito in vari terreni di coltura cellulare con o senza siero, eliminando la necessità di rimuovere i terreni dalle cellule coltivate prima di eseguire il saggio.
Attività enzimatica della NADH ossidasi
L'attività enzimatica della NADH ossidasi è stata determinata incubando concentrazioni crescenti di NADH ossidasi con NADH in un tampone di reazione enzimatica e misurando l'H₂O₂ prodotto con il ROS-Glo™ H₂O₂ Assay. Dopo aver determinato i livelli appropriati di NADH ossidasi e di substrato NADH, il saggio è stato utilizzato per identificare gli inibitori dell'enzima in una libreria chimica, osservando la diminuzione della luminescenza.
Multiplex con un test di citotossicità per ottenere dati più informativi per pozzetto
Le cellule HepG2 sono state trattate con composti che generano ROS (menadione o pirogallolo) o con un reagente che induce citotossicità (digitonina) e incubate a 37°C per 2 ore. Al momento del dosaggio sono stati aggiunti CellTox™ Green Dye (colorante impermeabile alla membrana che lega il DNA come indicatore di citotossicità) e H₂O₂ Substrate. Dopo l'incubazione è stata misurata la fluorescenza del colorante verde CellTox™ seguita dall'aggiunta della soluzione di rivelazione ROS-Glo™. Il segnale di luminescenza del ROS-Glo™ Assay è stato misurato dopo 20 minuti di incubazione.
Il codice G8820 contiene reagenti sufficienti per 100 dosaggi a 100µl/die in piastre a 96 pozzetti o 400 dosaggi a 25µl/die in piastre a 384 pozzetti. La Cat.# G8821 contiene reagenti sufficienti per 500 dosaggi a 100µl/die in piastre a 96 pozzetti o 2.000 dosaggi a 25µl/die in formato piastra a 384 pozzetti.
Case Study
Automated Assay Workflow for Mitochondrial Dysfunction
Challenge:
Louise Young, a research fellow at the University of Strathclyde, studies mitochondria’s role in Alzheimer’s and cancer. Her team needed a reliable, reproducible method to measure ROS output while screening compounds to decrease ROS levels. Traditional assays had wash steps, causing variability.
Result:
Using ROS-Glo™ H2O2 Assay, the team achieved faster turnaround with a no-wash protocol, greater reproducibility through luminescent readout and improved efficiency for quicker data collection.
Their workflow also includes RealTime-Glo™ Annexin V Assay for apoptosis/necrosis and CellTiter-Glo® 2.0 Assay for cell viability. Several compounds successfully reduced ROS, guiding future research into their protein targets.
Protocols
Complete Protocol
Quick Protocols
Specifications
Catalog Number:
What's in the box
| Item | Part # | Choose a size |
|---|---|---|
H2O2 Substrate, 10mM |
G882A | 1 × 40μl |
Signal Enhancer Solution |
G883A | 1 × 100μl |
H2O2 Substrate Dilution Buffer |
G922A | 1 × 2ml |
d-Cysteine, 100X |
V251A | 1 × 100μl |
|
Luciferin Detection Reagent |
V859A | 1 × 1 each |
|
Reconstitution Buffer |
V865A | 1 × 10ml |
SDS
Search for SDSCertificate of Analysis
Use Restrictions
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.Storage Conditions
What's in the box
| Item | Part # | Choose a size |
|---|---|---|
H2O2 Substrate, 10mM |
G882B | 1 × 200μl |
Signal Enhancer Solution |
G883B | 1 × 500μl |
H2O2 Substrate Dilution Buffer |
G922B | 1 × 10ml |
d-Cysteine, 100X |
V251B | 1 × 500μl |
|
Luciferin Detection Reagent |
V859B | 1 × 1 each |
|
Reconstitution Buffer |
V865B | 1 × 50ml |
SDS
Search for SDSCertificate of Analysis
Use Restrictions
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.Storage Conditions
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