GSH-Glo™ Glutathione Assay
A Luminescent-Based Assay for the Detection and Quantification of Glutathione (GSH)
- Measure reduced (GSH) or total (GSSG + GSH) glutathione from cells and tissues
- Measure GSH levels directly from cell culture wells
- Excellent sensitivity and easily scalable
Catalog Number:
Size
Catalog Number: V6911
Catalog Number: V6912
Rilevamento sensibile del GSH totale e ridotto nelle cellule
Il GSH-Glo™ Assay è un test basato sulla luminescenza per la rilevazione e la quantificazione del glutatione (GSH) nelle cellule o in vari campioni biologici. Una variazione dei livelli di GSH è importante per valutare le risposte tossicologiche ed è un indicatore di stress ossidativo, che può portare all'apoptosi o alla morte cellulare. Il saggio di rilevamento del GSH si basa sulla conversione di un derivato della luciferina in luciferina in presenza di GSH. La reazione è catalizzata da un enzima glutatione S-transferasi (GST) fornito nel kit. La luciferina formatasi viene rilevata in una reazione accoppiata utilizzando la luciferasi ricombinante Ultra-Glo™ che genera una luminescenza di tipo glow proporzionale alla quantità di glutatione presente nelle cellule. Il saggio di rilevamento del GSH rappresenta un'alternativa semplice, rapida e sensibile ai metodi colorimetrici e fluorescenti e può essere facilmente adattato ad applicazioni ad alta produttività.
Volete misurare il rapporto tra glutatione ridotto e ossidato?
Il GSH/GSSG-Glo™ Assay è un test luminescente in grado di quantificare il glutatione totale (GSH GSSG), il GSSG e il rapporto GSH-GSSG nelle cellule in coltura. Learn more.
Il test del glutatione GSH-Glo™
Il test GSH viene eseguito in due fasi. Nella prima fase, le cellule vengono lisate in presenza del substrato luciferina-NT e della glutatione S-transferasi. Il glutatione nelle cellule guida la formazione di luciferina. Nella seconda fase, viene aggiunto il reagente di rivelazione della luciferina per produrre una luce direttamente proporzionale alla quantità di GSH nella reazione.
Deplezione di GSH e recupero nelle cellule trattate
Le cellule HeLa (5000 cellule/pozzetto in formato 96 pozzetti) sono state esposte alla l-butionina-sulfossimina(BSO). La BSO inibisce la sintesi di GSH, riducendo così il livello di GSH cellulare.
Recupero con BSO: Le cellule sono state trattate con BSO per 20 ore, lavate 2 volte con PBS e coperte con terreno fresco senza BSO. Le cellule sono state analizzate per il GSH dopo 40 ore.
BSO 20 ore: Cellule trattate con BSO e dosate per GSH dopo 20 ore.
40 ore BSO: Cellule trattate con BSO, lavate a 20 ore e aggiunte di terreno fresco più BSO. Le cellule sono state analizzate per il GSH dopo 40 ore.
Il semplice test di rilevamento del GSH a due reagenti riduce al minimo il numero di passaggi del test rispetto ai test GSH convenzionali ed è facilmente adattabile ad applicazioni a più alto rendimento. Non è necessaria alcuna fase di deproteinizzazione e i risultati si ottengono in soli 30 minuti.
Il metodo luminescente del GSH-Glo™ Glutathione Assay evita l'intrinseca fluorescenza di fondo associata ad altri metodi, fornendo così un eccellente rapporto segnale-sfondo. Un'emivita superiore a 5 ore determina un segnale stabile, consentendo l'elaborazione in batch di molte piastre contemporaneamente con il GSH-Glo™ Assay.
Il GSH-Glo™ Assay è consigliato per la misurazione dei livelli di glutatione totale nei campioni. Per misurare il rapporto, si consiglia il GSH/GSSG-Glo™ Assay.
Deplezione di GSH da parte dell'acetaminofene negli epatociti
I livelli di GSH nei lisati di cellule aderenti in piastre da 24 pozzetti sono stati misurati con il GSH-Glo™ Glutathione Assay. Le concentrazioni di GSH sono state determinate per interpolazione da una curva standard di GSH generata con il sistema bioluminescente. L'esposizione a 5mM di acetaminofene (APAP) per tre ore ha ridotto sostanzialmente il GSH solo dopo il trattamento per due giorni con un induttore di P450, 30 μM di pregnenolone 16a-carbonitrile (PCN), mentre l'esposizione ad APAP o PCN da sola ha causato poche differenze nei livelli di GSH.
Protocols
Complete Protocol
Specifications
Catalog Number:
What's in the box
| Item | Part # | Choose a size |
|---|---|---|
Reconstitution Buffer with Esterase |
V144A | 1 × 10ml |
|
Luciferin-NT |
V687A | 1 × 100μl |
|
GSH-Glo™ Reaction Buffer |
V688A | 1 × 10ml |
|
Glutathione S-Transferase |
V689A | 1 × 100μl |
|
Glutathione, 5mM |
V690A | 1 × 100μl |
|
Luciferin Detection Reagent |
V859A | 1 × 1 each |
SDS
Search for SDSCertificate of Analysis
Use Restrictions
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.Storage Conditions
What's in the box
| Item | Part # | Choose a size |
|---|---|---|
Reconstitution Buffer with Esterase |
V144B | 1 × 50ml |
|
Luciferin-NT |
V687B | 1 × 500μl |
|
GSH-Glo™ Reaction Buffer |
V688B | 1 × 50ml |
|
Glutathione S-Transferase |
V689B | 1 × 500μl |
|
Glutathione, 5mM |
V690A | 1 × 100μl |
|
Luciferin Detection Reagent |
V859B | 1 × 1 each |
SDS
Search for SDSCertificate of Analysis
Use Restrictions
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.Storage Conditions
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