GSH/GSSG-Glo™ Assay

Il GSH/GSSG-Glo™ Assay è un sistema basato sulla luminescenza che rileva e quantifica il glutatione totale (GSH GSSG), il GSSG e il rapporto GSH-GSSG nelle cellule in coltura. Il glutatione ridotto (GSH) e il glutatione ossidato (GSSG) esistono entrambi nelle cellule sane, la maggior parte dei quali è in forma ridotta (GSH). Una variazione dei livelli di GSH e GSSG è importante per valutare le risposte tossicologiche ed è un indicatore di stress ossidativo, che può portare all'apoptosi o alla morte cellulare. Il saggio per il rilevamento di GSH e GSSG fornisce un formato semplice e rapido per piastre multipozzetto in cui segnali luminescenti stabili sono correlati alla concentrazione di GSH totale o GSSG di un campione direttamente nei pozzetti di coltura.

Entrambe le determinazioni del glutatione totale e del GSSG si basano sulla reazione in cui la conversione GSH-dipendente di una sonda GSH, la luciferina-NT, in luciferina da parte di un enzima glutatione-S-transferasi è accoppiata a una reazione di luciferasi a lucciola. La luce prodotta dalla luciferasi dipende dalla quantità di luciferina formata, che a sua volta dipende dalla quantità di GSH presente. In questo modo il segnale luminescente è proporzionale alla quantità di GSH. La determinazione del glutatione totale e della quantità di GSSG viene eseguita in reazioni parallele. In una configurazione, i reagenti del saggio misurano il glutatione totale utilizzando un agente riducente che converte tutto il glutatione, GSH e GSSG in un lisato cellulare nella forma ridotta, GSH. In una seconda configurazione, i reagenti del test vengono utilizzati per misurare solo la forma ossidata, GSSG. In questo caso, viene aggiunto un reagente che blocca tutto il GSH lasciando intatto il GSSG. Questa fase di blocco è seguita da una fase di riduzione che converte il GSSG in GSH per la quantificazione nella reazione luminescente. Poiché i test vengono eseguiti direttamente sulle cellule nei pozzetti di coltura, la perdita di GSH o GSSG è ridotta al minimo, riducendo la variabilità.