I dosaggi P450-Glo™ CYP3A4 forniscono un metodo omogeneo e luminescente per misurare l'attività del citocromo P450 CYP3A4. I saggi sono progettati per misurare le attività dei P450 da fonti ricombinanti e native e per testare gli effetti di analiti come farmaci e nuove entità chimiche sulle attività dei P450. Questi saggi luminescenti presentano una sensibilità eccellente, bassi segnali di fondo e un'ampia gamma dinamica.
I saggi P450-Glo™ utilizzano substrati luminogenici P450 che sono derivati della luciferina di coleottero, un substrato per gli enzimi luciferasi. I derivati non sono substrati per la luciferasi, ma vengono convertiti dalle P450 in luciferina, che a sua volta reagisce con la luciferasi per produrre luce direttamente proporzionale all'attività della P450.
I saggi P450-Glo™ generano un segnale luminescente di tipo "glow", prodotto utilizzando luciferine derivatizzate come substrati delle P450 e una luciferasi ricombinante stabilizzata (Ultra-Glo™ Luciferase) accoppiata a un sistema tampone proprietario. L'emivita dell'emissione luminescente è superiore a due ore, eliminando la necessità di luminometri con iniettori e consentendo l'elaborazione di piastre in batch. La formulazione riduce inoltre al minimo l'incidenza di falsi positivi dovuti all'inibizione della luciferasi da parte degli analiti durante lo screening degli inibitori del citocromo P450.
Il dimetilsolfossido (DMSO), un solvente comunemente usato per solubilizzare i composti chimici, può inibire significativamente l'attività dell'isoforma 3A4 del citocromo P450, anche a basse concentrazioni (<0,1%). Il saggio P450-Glo™ CYP3A4 System (Luciferin-PPXE) DMSO-Tolerant è stato specificamente progettato per tollerare il DMSO nella reazione 3A4. Il saggio presenta una variazione minima o nulla nel rapporto segnale-sfondo in presenza di 0,2 MSO rispetto a un controllo senza DMSO.