Metabolismo lipidico
I test Promega per il metabolismo lipidico forniscono metodi sensibili e semplici per rilevare e quantificare glicerolo, trigliceridi, colesterolo ed esteri del colesterolo. Questi test possono essere utilizzati per quantificare la lipolisi e la lipogenesi, oltre ad altri processi biologici. I dosaggi del metabolismo lipidico si basano sulla tecnologia bioluminescente di base presente in altri dosaggi del metabolismo di Promega.
Questi test sono adattabili a molti campioni biologici, tra cui cellule coltivate in monostrato o in strutture 3D, tessuti, terreno di coltura cellulare, plasma e siero. I tipi di cellule utilizzati con i test sul metabolismo lipidico includono epatociti coltivati in monostrato e in colture 3D e adipociti. Il protocollo elimina la necessità di estrazione organica, semplificando le fasi di preparazione del campione. I test sono sensibili e presentano un ampio intervallo lineare, riducendo il numero di diluizioni del campione necessarie e aumentando la capacità quantitativa di discriminare piccole variazioni nei livelli dei metaboliti lipidici.
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Introduzione ai dosaggi del metabolismo lipidico
Le opzioni per i test del metabolismo lipidico includono i test bioluminescenti basati su plate-reader per rilevare i livelli di glicerolo, trigliceridi, colesterolo ed esteri del colesterolo nei campioni biologici. Questi test sono veloci e facili da usare, poiché non richiedono un'estrazione organica e solo due fasi di incubazione (a 37°C o a temperatura ambiente), ;e forniscono risultati quantitativi con l'uso di una curva standard. A differenza della colorazione e di altri metodi che richiedono un'estrazione organica, questi saggi bioluminescenti sono semplici da implementare per i laboratori che si avvicinano per la prima volta alla ricerca sul metabolismo lipidico.
I lipidi svolgono molti ruoli in un organismo, tra cui funzioni di segnalazione, agiscono come componenti delle membrane biologiche e come forma di immagazzinamento di energia. La comprensione dei cambiamenti nei livelli di lipidi in campioni biologici come campioni di colture cellulari, strutture cellulari 3D coltivate, tessuti e campioni di plasma o siero è un uso dei saggi del metabolismo lipidico.
L'alterazione del metabolismo lipidico provoca una serie di disturbi. La steatosi si riferisce all'accumulo aberrante di lipidi nei tessuti. La steatosi e la misurazione dei livelli anormali di lipidi nei tessuti sono importanti per la ricerca sui disturbi metabolici, tra cui il diabete, l'obesità e i disturbi epatici. La malattia del fegato grasso non alcolica (NAFLD) e la steatoepatite non alcolica (NASH), due patologie epatiche in drastico aumento a livello globale, sono obiettivi chiave di molti programmi di scoperta di farmaci. I saggi del metabolismo lipidico sono strumenti utili per lo studio di questi disturbi.
La lipolisi è il processo mediante il quale le cellule idrolizzano una molecola di trigliceride in tre molecole di acidi grassi e una molecola di glicerolo. Un aumento della lipolisi può essere misurato come un aumento dei livelli di glicerolo libero in campioni di colture cellulari utilizzando un test del glicerolo.
La lipogenesi è la creazione di trigliceridi da una molecola di glicerolo e tre molecole di acidi grassi ed è un modo in cui le cellule immagazzinano energia. Un aumento della lipogenesi può essere misurato come quantificazione dei trigliceridi intracellulari mediante un saggio dei trigliceridi. Il dosaggio dei trigliceridi quantifica i livelli di trigliceridi determinando il livello totale di glicerolo, il livello di glicerolo libero e la differenza risultante è il livello di trigliceridi.
Il colesterolo è un componente essenziale delle membrane cellulari ed è necessario per la produzione di ormoni. Tuttavia, un aumento del livello di colesterolo circolante è associato a un maggior rischio di malattie cardiovascolari e di aterosclerosi. Il colesterolo viene trasportato nel plasma sotto forma di estere del colesterolo, nelle lipoproteine a bassa densità (LDL) o nelle lipoproteine ad alta densità (HDL). Una molecola di estere del colesterolo viene convertita in una molecola di colesterolo attraverso l'azione dell'enzima colesterolo esterasi. I dosaggi del colesterolo sono utilizzati per misurare i livelli di colesterolo totale (compresi gli esteri del colesterolo) e di colesterolo libero, in diversi tipi di campioni.
