Vettori e kit di clonazione
Il clonaggio di uno specifico frammento di DNA in un vettore come un plasmide è una delle fasi fondamentali che consente un'ulteriore caratterizzazione di quella sequenza. Vettori come la serie pGEM® contengono siti di clonazione multipli per accogliere i frammenti generati dalla digestione con specifici enzimi di restrizione. Le sequenze create dalla PCR e dai relativi metodi di clonazione TA possono essere facilmente ligate nei vettori T di pGEM®. Per molteplici applicazioni a valle (ad esempio, l'espressione di proteine), l'esclusivo sistema di clonazione Flexi® può trasferire comodamente i frammenti in più vettori.
Filter By
Acquista tutti i vettori e i kit di clonazione
Showing 26 of 26 Products
Vettori e kit di clonazione correlati Risorse
Che cos'è un vettore di clonazione?
Esistono molti tipi di vettori di clonazione, ma i più comunemente utilizzati sono i plasmidi. Un vettore plasmidico di base contiene caratteristiche che consentono di inserire comodamente un frammento di DNA nel vettore per la successiva manipolazione o analisi. Nel subclonaggio classico, il vettore e la sequenza di interesse vengono tagliati con uno specifico enzima di restrizione e il plasmide digerito risultante e la sequenza di DNA di interesse vengono uniti mediante legatura molecolare utilizzando la DNA ligasi T4.
Il TA cloning è una tecnica che evita l'uso degli enzimi di restrizione ed è quindi più facile e veloce del subclonaggio tradizionale. La tecnica si basa sulla capacità dell'adenina (A) e della timina (T) di diversi frammenti di DNA di ibridarsi e, in presenza della DNA ligasi T4, di legarsi tra loro. I prodotti della PCR vengono solitamente amplificati utilizzando la Taq DNA polimerasi, che aggiunge preferenzialmente un'adenina all'estremità 3' del prodotto di amplificazione. Nel clonaggio TA, tali inserti amplificati dalla PCR vengono clonati in vettori “T” linearizzati che hanno sporgenze di timina 3' complementari.
