Clonazione e marcatori del DNA
Gli strumenti che modificano gli acidi nucleici sono alla base di molte tecniche di biologia molecolare, come il subclonaggio. Per il clonaggio convenzionale di frammenti di DNA, forniamo una serie di enzimi di restrizione e la DNA ligasi T4. Per la trasformazione batterica offriamo una scelta di cellule competenti, tra cui il nostro esclusivo ceppo Single Step KRX.
Per altre applicazioni di clonazione offriamo T4 DNA chinasi, fosfatasi alcalina di vitello e altri enzimi di modifica. Per la trascrizione dell'RNA sono disponibili le RNA polimerasi T7, SP6 e T3.
Un assortimento di marcatori di DNA/RNA, tra cui bench top e step ladder, consente di confermare il successo dell'esperimento.
Gruppi di prodotto "Clonazione e marcatori del DNA
Ceppi batterici e cellule competenti
Cellule competenti pronte per la trasformazione e stock di glicerolo di E. coli.
Vettori e kit di clonazione
Include una serie di vettori di clonazione e subclonazione e i comodi sistemi di clonazione Flexi® per l'espressione delle proteine.
Marcatori di peso molecolare
Marcatori di DNA in varie dimensioni e formati, compresi marcatori da banco e step ladder. Include marcatori di RNA e proteine.
Enzimi e reagenti per la biologia molecolare
Trovate ligasi, polimerasi, PNK, fosfatasi, nucleasi e altro ancora.
Enzimi di restrizione
Enzimi di qualità e dalle prestazioni testate per le vostre esigenze di clonazione di routine.
I migliori prodotti di clonazione e marcatori di DNA per il vostro laboratorio
T4 DNA Ligase
Unisce due filamenti di dsDNA con estremità coesive o smussate utilizzando i gruppi 5´-fosfato e 3´-idrossile dei nucleotidi adiacenti.
M1801, M1804, M1794
Single Step (KRX) Competent Cells
Cellule di E. coli ideali per l'espressione di proteine ricombinanti, che offrono una trasformazione efficiente e l'espressione regolata di proteine.
L3002
BenchTop 1kb DNA Ladder
Tredici frammenti blunt-ended di 250-10.000 bp premiscelati con colorante di caricamento.
G7541
Avete bisogno di un prodotto modificato?
Contattateci per discutere le opzioni di dimensioni, formulazione, concentrazione, confezionamento e formato personalizzati per gli enzimi di clonazione e modifica Promega.
Introduzione al clonaggio e ai marcatori del DNA
Il subclonaggio è una procedura di base della biologia molecolare che viene utilizzata per spostare gli inserti da un vettore a un altro per ottenere la funzionalità desiderata e per caratterizzare una sequenza di DNA di interesse.
Un metodo per realizzare il trasferimento di un inserto di DNA utilizza enzimi di restrizione per digerire sia il frammento che il vettore di destinazione, che è tipicamente un plasmide. La conferma dell'avvenuta digestione si ottiene confrontando le dimensioni previste dei campioni digeriti con i frammenti di DNA marker. A tale scopo, i campioni vengono fatti scorrere su gel di agarosio per separare i frammenti di DNA in base alle dimensioni. La DNA ligasi T4 viene quindi utilizzata per "incollare" il frammento desiderato nel plasmide digerito.
Il passo successivo è la trasformazione. La trasformazione dei batteri con i plasmidi è importante perché i batteri sono utilizzati come mezzo per conservare e replicare i plasmidi. Le cellule di E. coli hanno maggiori probabilità di incorporare DNA estraneo se le loro pareti cellulari sono modificate in modo che il DNA possa passare più facilmente. Tali cellule sono dette competenti. La selezione delle cellule trasformate con successo avviene mediante selezione antibiotica per il plasmide di interesse.
Ci sono molte opzioni per confermare se il trasferimento è avvenuto con successo, tra cui la PCR, la digestione con enzimi di restrizione o il sequenziamento. Una volta confermato, il vettore ricombinante può essere utilizzato per una varietà di applicazioni, come l'espressione di proteine o la trascrizione di RNA.
