UMP/CMP-Glo™ Glycosyltransferase Assay
Universal Glycosyltransferase Activity Assay
- Easy, "add-incubate-read" protocol
- Detects sialyltransferases and phosphoglycosyltransferases that use CMP-, CDP- or UDP-sugars as donor substrates
- Ideal for low-activity glycosyltransferases
Catalog Number:
Size
Catalog Number: VA1130
Catalog Number: VA1131
Catalog Number: VA1132
Un semplice test bioluminescente per l'attività glicosiltransferasica
Il saggio per glicosiltransferasi UMP/CMP-Glo™ è un metodo omogeneo di aggiunta di un singolo reagente per rilevare rapidamente la formazione di UMP o CMP nelle reazioni di glicosiltransferasi. Dopo la reazione di glicosiltransferasi, viene aggiunto un volume uguale di reagente di rivelazione UMP/CMP per convertire simultaneamente il prodotto UMP o CMP in ATP e generare luce in una reazione di luciferasi. La luce generata viene rilevata con un luminometro e l'emissione di luce è proporzionale alla concentrazione di UMP o CMP, da un minimo di nM a 50μM. La luminescenza può essere correlata alla concentrazione di UMP o CMP utilizzando una curva standard di UMP o CMP.
Aggiungere-Mescolare-Leggere per ottenere risultati
Partendo da enzimi purificati, donatori di zucchero e molecole accettatrici, è possibile rilevare i prodotti di reazione UMP o CMP delle fosfoglicosiltransferasi o delle sialiltransferasi, rispettivamente. È sufficiente aggiungere il reagente di rivelazione UMP/CMP e misurare la luminescenza.
Funziona con molte sialiltransferasi e fosfoglicosiltransferasi.
Il saggio UMP/CMP-Glo™ può essere utilizzato per misurare l'attività di quasi tutte le sialiltransferasi che utilizzano zuccheri CMP o di tutte le fosfoglicosiltransferasi che utilizzano zuccheri UDP come substrato. Qui abbiamo esaminato le sialiltransferasi coinvolte nella O-glicosilazione delle proteine.
Ideale per glicosiltransferasi e fosfoglicosiltransferasi a bassa attività
La sensibilità del saggio per glicosiltransferasi UMP/CMP-Glo™ consente di rilevare basse concentrazioni di UMP o CMP con un elevato range dinamico. Pertanto, sia che si tratti di una glicosiltransferasi a bassa attività, la cui velocità di trasferimento degli zuccheri è bassa, sia che si utilizzi una bassa concentrazione di enzima che produce una piccola quantità di UMP o CMP, è possibile ottenere un elevato rapporto segnale-sfondo utilizzando il saggio.
I dati riportati di seguito mostrano la linearità e la sensibilità del saggio UMP/CMP-Glo™ Glycosyltransferase Assay. In questo caso, è stata preparata una curva standard di UMP o CMP nell'intervallo di concentrazione indicato in 25µl di tampone di reazione glicosiltransferasi 1X in una piastra a 96 pozzetti di colore bianco solido. Il saggio della glicosiltransferasi UMP/CMP-Glo™ è stato eseguito utilizzando 25µl di reagente di rivelazione UMP/CMP a temperatura ambiente. La luminescenza è stata registrata con un luminometro GloMax®. I valori rappresentano la media di due repliche. Le tabelle mostrano la luminescenza misurata 1 ora dopo l'aggiunta del reagente di rivelazione UMP/CMP e i rapporti segnale-sfondo calcolati per ciascuna concentrazione della curva standard.
Il segnale luminescente è stabile per diverse ore
Il saggio UMP/CMP-Glo™ genera unsegnale luminescente altamente stabile per oltre 3 ore, il che rende conveniente l'elaborazione in lotti delle piastre di saggio.
I dati qui riportati dimostrano che il segnale ottenuto con il saggio UMP/CMP-Glo™ è stabile per diverse ore. Per determinare la stabilità del segnale, la luminescenza è stata registrata a 1 e 3 ore dall'aggiunta del reagente di rilevazione. Il rapporto segnale-sfondo non è cambiato durante il tempo misurato (dati non mostrati). RLU = unità di luce relativa.
Protocols
Specifications
Catalog Number:
What's in the box
| Item | Part # | Choose a size |
|---|---|---|
ATP Detection Substrate |
V363C | 1 × 1 vial |
Nucleotide Detection Buffer |
V696A | 1 × 5ml |
UMP, 10mM |
VA113A | 1 × 100μl |
CMP, 10mM |
VA114A | 1 × 100μl |
UMP/CMP-Glo™ Enzyme |
VA115A | 1 × 200μl |
SDS
Search for SDSCertificate of Analysis
Use Restrictions
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.Storage Conditions
See Protocol for detailed storage recommendations.
What's in the box
| Item | Part # | Choose a size |
|---|---|---|
|
ATP Detection Substrate |
V363A | 1 × 1 vial |
Nucleotide Detection Buffer |
V696B | 1 × 10ml |
UMP, 10mM |
VA113A | 1 × 100μl |
CMP, 10mM |
VA114A | 1 × 100μl |
UMP/CMP-Glo™ Enzyme |
VA115B | 1 × 400μl |
SDS
Search for SDSCertificate of Analysis
Use Restrictions
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.Storage Conditions
See Protocol for detailed storage recommendations.
What's in the box
| Item | Part # | Choose a size |
|---|---|---|
|
ATP Detection Substrate |
V363B | 1 × 1 vial |
Nucleotide Detection Buffer |
V696C | 1 × 100ml |
UMP, 10mM |
VA113A | 1 × 100μl |
CMP, 10mM |
VA114A | 1 × 100μl |
UMP/CMP-Glo™ Enzyme |
VA115C | 4 × 1ml |
SDS
Search for SDSCertificate of Analysis
Use Restrictions
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.Storage Conditions
See Protocol for detailed storage recommendations.
Related Products
Similar Products
UDP-Glo™ Glycosyltransferase Assay
Un test universale "add-incubate-read" per l'attività della glicosiltransferasi.
V6961, V6962, V6963, V6971, V6972, V6981, V6982, V6991, V6992, V7051, V7052, V7061, V7062
GDP-Glo™ Glycosyltransferase Assay
Un saggio bioluminescente per misurare l'attività delle glicosiltransferasi che utilizzano substrati di GDP-zucchero.
VA1090, VA1091, VA1092, VA1093, VA1094, VA1095, VA1096
Frequently Used With
Ultra Pure UDP-Sugar Substrates
Substrati da utilizzare con il saggio UDP-Glo™ Glycosyltransferase Assay.
V7071, V7072, V7081, V7082, V7091, V7092, V7171, V7172, V7321, V7322
GloMax® Explorer System
Easy-to-use, flexible multimode detection system.
GM3500, GM3510
GloMax® Discover System
High-performance microplate reader for detecting luminescence, fluorescence and absorbance.
GM3000
GloMax® Navigator System
Dedicated microplate luminometer.
GM2000, GM2010
