GDP-Glo™ Glycosyltransferase Assay
Universal Glycosyltransferase Activity Assay
- Easy, "add-incubate-read" protocol
- Detects any glycosyltransferase that uses GDP-sugar as a substrate
- Ideal for low-activity glycosyltransferases
Catalog Number:
Size
Add a GDP-sugar substrate
Catalog Number: VA1090
Catalog Number: VA1091
Catalog Number: VA1092
Catalog Number: VA1093
Catalog Number: VA1094
Catalog Number: VA1095
Catalog Number: VA1096
Un semplice saggio bioluminescente per l'attività glicosiltransferasica
Il saggio GDP-Glo™ per glicosiltransferasi è un metodo omogeneo, a singola aggiunta di reagente, per rilevare rapidamente la formazione di GDP nelle reazioni di glicosiltransferasi. Dopo la reazione della glicosiltransferasi, viene aggiunto un volume uguale di reagente di rivelazione del GDP per convertire simultaneamente il prodotto GDP in ATP e generare luce in una reazione di luciferasi. La luce generata viene rilevata con un luminometro e l'emissione di luce è proporzionale alla concentrazione di GDP, da un minimo di nM a un massimo di 25μM. La luminescenza può essere correlata alla concentrazione di GDP utilizzando una curva standard di GDP.
Aggiungere-Mescolare-Leggere per ottenere risultati
Partendo da enzimi purificati, donatori di zucchero e molecole accettore, è possibile rilevare il prodotto della reazione glicosiltransferasica GDP. È sufficiente aggiungere il reagente di rivelazione del PIL e misurare la luminescenza.
Funziona con la maggior parte delle glicosiltransferasi
Il saggio GDP-Glo™ può essere utilizzato per misurare l'attività di quasi tutte le glicosiltransferasi che utilizzano lo zucchero GDP come substrato. Qui abbiamo esaminato le fucosiltransferasi coinvolte nella visualizzazione dell'antigene sulle cellule immunitarie.
Rileva basse quantità nanomolari di PIL; ideale per glicosiltransferasi a bassa attività
La sensibilità del saggio GDP-Glo™ Glycosyltransferase Assay consente di rilevare basse concentrazioni di GDP con un elevato range dinamico. Pertanto, sia che si tratti di una glicosiltransferasi a bassa attività, la cui velocità di trasferimento degli zuccheri è bassa, sia che si utilizzi una bassa concentrazione di enzima che produce una piccola quantità di GDP, è possibile ottenere un elevato rapporto segnale-sfondo utilizzando il saggio.
I dati riportati di seguito mostrano la linearità e la sensibilità del saggio GDP-Glo™ Glycosyltransferase Assay. In questo caso, è stata preparata una curva standard di GDP nell'intervallo di concentrazione indicato in 25µl di tampone di reazione glicosiltransferasi 1X in una piastra a 96 pozzetti di colore bianco solido. Il test GDP-Glo™ glicosiltransferasi è stato eseguito utilizzando 25µl di reagente di rivelazione del GDP a temperatura ambiente. La luminescenza è stata registrata con un luminometro GloMax®. I valori rappresentano la media di quattro repliche. La tabella mostra la luminescenza misurata 1 ora dopo l'aggiunta del reagente di rivelazione del PIL e il rapporto segnale-sfondo calcolato per ciascuna concentrazione della curva standard.
Il segnale luminescente è stabile per diverse ore
Il saggio GDP-Glo™ genera unsegnale luminescente altamente stabile per oltre 3 ore, rendendo conveniente l'elaborazione in batch di più piastre di saggio.
I dati qui riportati dimostrano che il segnale ottenuto con il saggio GDP-Glo™ è stabile per diverse ore. Per determinare la stabilità del segnale, la luminescenza è stata registrata a 1 e 3 ore dall'aggiunta del reagente di rilevazione. Il rapporto segnale-sfondo non è cambiato durante il tempo misurato (dati non mostrati). RLU = unità di luce relativa.
Protocols
Specifications
Catalog Number:
What's in the box
| Item | Part # | Choose a size |
|---|---|---|
ATP Detection Substrate |
V363C | 1 × 1 vial |
Nucleotide Detection Buffer |
V696A | 1 × 5ml |
Enzyme Dilution Buffer |
V773A | 1 × 1.5ml |
GDP, 10mM |
VA111A | 1 × 100μl |
GDP-Glo™ Enzyme |
VA112A | 1 × 20μl |
SDS
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What's in the box
| Item | Part # | Choose a size |
|---|---|---|
|
ATP Detection Substrate |
V363A | 1 × 1 vial |
Nucleotide Detection Buffer |
V696B | 1 × 10ml |
Enzyme Dilution Buffer |
V773A | 2 × 1.5ml |
GDP, 10mM |
VA111A | 1 × 100μl |
GDP-Glo™ Enzyme |
VA112B | 1 × 40μl |
SDS
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What's in the box
| Item | Part # | Choose a size |
|---|---|---|
|
ATP Detection Substrate |
V363B | 1 × 1 vial |
Nucleotide Detection Buffer |
V696C | 1 × 100ml |
Enzyme Dilution Buffer |
V773B | 1 × 15ml |
GDP, 10mM |
VA111A | 1 × 100μl |
GDP-Glo™ Enzyme |
VA112C | 1 × 200μl |
SDS
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What's in the box
| Item | Part # | Choose a size | Concentration | Available Separately |
|---|---|---|---|---|
ATP Detection Substrate |
V363C | 1 × 1 vial | ||
Nucleotide Detection Buffer |
V696A | 1 × 5ml | ||
Enzyme Dilution Buffer |
V773A | 1 × 1.5ml | ||
GDP, 10mM |
VA111A | 1 × 100μl | ||
GDP-Glo™ Enzyme |
VA112A | 1 × 20μl | ||
GDP-Fucose |
VA109A | 1 × 50μl | 50mM | View Product |
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| Item | Part # | Choose a size | Concentration | Available Separately |
|---|---|---|---|---|
|
ATP Detection Substrate |
V363A | 1 × 1 vial | ||
Nucleotide Detection Buffer |
V696B | 1 × 10ml | ||
Enzyme Dilution Buffer |
V773A | 2 × 1.5ml | ||
GDP, 10mM |
VA111A | 1 × 100μl | ||
GDP-Glo™ Enzyme |
VA112B | 1 × 40μl | ||
GDP-Fucose |
VA109A | 1 × 50μl | 50mM | View Product |
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| Item | Part # | Choose a size | Concentration | Available Separately |
|---|---|---|---|---|
ATP Detection Substrate |
V363C | 1 × 1 vial | ||
Nucleotide Detection Buffer |
V696A | 1 × 5ml | ||
Enzyme Dilution Buffer |
V773A | 1 × 1.5ml | ||
GDP, 10mM |
VA111A | 1 × 100μl | ||
GDP-Glo™ Enzyme |
VA112A | 1 × 20μl | ||
GDP-Mannose |
VA110A | 1 × 50μl | 100mM | View Product |
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| Item | Part # | Choose a size | Concentration | Available Separately |
|---|---|---|---|---|
|
ATP Detection Substrate |
V363A | 1 × 1 vial | ||
Nucleotide Detection Buffer |
V696B | 1 × 10ml | ||
Enzyme Dilution Buffer |
V773A | 2 × 1.5ml | ||
GDP, 10mM |
VA111A | 1 × 100μl | ||
GDP-Glo™ Enzyme |
VA112B | 1 × 40μl | ||
GDP-Mannose |
VA110A | 1 × 50μl | 100mM | View Product |
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