Mitochondrial ToxGlo™ Assay

Il test ToxGlo™ mitocondriale è un metodo di analisi basato su cellule che impiega una chimica di analisi multiplexata ad aggiunta sequenziale per prevedere la potenziale disfunzione mitocondriale in seguito all'esposizione a xenobiotici. Il saggio si basa sulla misurazione differenziale di biomarcatori associati a variazioni dell'integrità della membrana cellulare e dei livelli di ATP cellulare rispetto a cellule di controllo trattate con veicoli durante brevi periodi di esposizione. L'integrità della membrana cellulare viene innanzitutto valutata misurando la presenza o l'assenza di un'attività proteica distinta associata alla necrosi, utilizzando un substrato peptidico fluorogenico (bis-AAF-R110) per misurare l'"attività proteica delle cellule morte". Il substrato bis-AAF-R110 non è in grado di attraversare la membrana intatta delle cellule vive e pertanto non fornisce alcun segnale con le cellule vitali. Successivamente, l'ATP viene misurato aggiungendo un reagente di rilevazione dell'ATP, con conseguente lisi cellulare e generazione di un segnale luminescente proporzionale alla quantità di ATP presente. Le due serie di dati possono essere combinate per produrre profili rappresentativi della disfunzione mitocondriale o di meccanismi citotossici non mitocondriali.

Le cellule dei mammiferi generano ATP attraverso metodi mitocondriali (fosforilazione ossidativa) e non mitocondriali (glicolisi). Per ottenere una risposta mitocondriale ottimale, può essere necessario perfezionare le condizioni di coltura cellulare. La sostituzione del terreno di coltura con glucosio con un terreno di coltura contenente galattosio può aumentare il consumo di ossigeno cellulare e aumentare la suscettibilità mitocondriale ai mitocondri.