Saggi di stress ossidativo

Lo stress ossidativo si verifica quando aumenta la produzione di specie reattive dell'ossigeno (ROS) o diminuisce l'efficacia delle difese antiossidanti cellulari. Le cellule generano ROS come risultato dell'aumento del metabolismo o di una risposta allo stress. Il glutatione, un antiossidante, serve a mitigare i danni dei ROS. I test per determinare lo stress ossidativo possono misurare i livelli di specie reattive tossiche dell'ossigeno o i livelli di antiossidanti cellulari.

Il glutatione è un antiossidante presente nelle cellule eucariotiche, il più delle volte nella forma ridotta (GSH). Una piccola parte del glutatione cellulare è allo stato ossidato (GSSG). Il GSSG è un ottimo indicatore dello stress ossidativo nelle cellule. 

Il GSH/GSSG-Glo™ Assay è un sistema basato sulla luminescenza utilizzato per rilevare e quantificare il glutatione sia allo stato ossidato che ridotto. La luminescenza stabile è prodotta dalla conversione della luciferina-NT, una sonda GSH, in luciferina da parte di un enzima glutatione S-transferasi. Questa conversione in luciferina è accoppiata a una reazione di luciferasi a lucciola che produce un segnale luminescente proporzionale alla quantità di GSH presente.

Le specie reattive dell'ossigeno (ROS) sono molecole chimicamente reattive che contengono ossigeno. Sono utili alla cellula come sottoprodotti naturali del metabolismo e hanno un ruolo nella segnalazione cellulare, ma possono anche causare danni cellulari e stress ossidativo. Gli alti tassi di proliferazione sono legati a un aumento dei ROS. Poiché vari ROS vengono convertiti in _H2O2 nella cellula e l'_H2O2 è il ROS più longevo, un aumento di _H2O2 può riflettere un aumento generale dei livelli di ROS cellulari. Il ROS-Glo™ Assay utilizza un substrato che reagisce direttamente con _H2O2 per generare un segnale luminescente proporzionale al livello di _H2O2 presente.