Misura il numero di cellule vive e morte contemporaneamente
Il test a singola aggiunta di reagente, omogeneo e fluorescente, misura la vitalità cellulare e la citotossicità rilevando due distinte attività proteasiche. L'attività della proteasi a cellule vive è limitata alle cellule vitali intatte e viene misurata utilizzando un substrato peptidico fluorogenico permeante le cellule (GF-AFC Substrate). Il substrato entra nelle cellule intatte dove viene scisso per generare un segnale fluorescente proporzionale al numero di cellule vive. Questo marcatore di attività proteasica a cellule vive diventa inattivo quando si perde l'integrità della membrana e si disperde nel terreno di coltura circostante. Un secondo substrato peptidico fluorogenico, permeabile alle cellule (substrato bis-AAF-R110), viene utilizzato per misurare l'attività proteica delle cellule morte, rilasciata da cellule che hanno perso l'integrità della membrana.
Il protocollo omogeneo, "add-mix-measure", elimina l'elaborazione in parallelo delle piastre e riduce i costi della coltura cellulare; inoltre, il rapporto tra cellule vive e morte è indipendente dal numero di cellule e normalizza i dati. La normalizzazione dei dati per il numero di cellule rende i risultati più comparabili da pozzetto a pozzetto, da piastra a piastra, giorno per giorno.
Le misure complementari di cellule vive e morte con prodotti chimici indipendenti fungono da controlli interni l'uno per l'altro e la capacità di multiplexing con la maggior parte dei saggi di apoptosi o di reporter genetici bioluminescenti basati su cellule di Promega consente di ottenere un maggior numero di dati per pozzetto.
Note
Il codice G9200 contiene reagenti sufficienti per 100 dosaggi a 100μl/assay in un formato a 96 pozzetti o 400 dosaggi a 25μl/assay in un formato a 384 pozzetti. Il codice G9201 contiene reagenti sufficienti per 500 dosaggi a 100μl/die in un formato a 96 pozzetti o 2.000 dosaggi a 25μl/die in un formato a 384 pozzetti. Il numero di catalogo G9202 contiene reagenti sufficienti per 1.000 dosaggi a 100μl/die in un formato a 96 pozzetti o 4.000 dosaggi a 25μl/die in un formato a 384 pozzetti.
Protocols
Complete Protocol
Specifications
Catalog Number:
What's in the box
| Item | Part # | Choose a size |
|---|---|---|
|
GF-AFC Substrate |
G608A | 1 × 10μl |
|
bis-AAF-R110 Substrate |
G609A | 1 × 10μl |
|
Assay Buffer |
G610A | 1 × 10ml |
SDS
Search for SDSCertificate of Analysis
Use Restrictions
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.Storage Conditions
Store at –20°C.
What's in the box
| Item | Part # | Choose a size |
|---|---|---|
|
GF-AFC Substrate |
G608A | 5 × 10μl |
|
bis-AAF-R110 Substrate |
G609A | 5 × 10μl |
|
Assay Buffer |
G610A | 5 × 10ml |
SDS
Search for SDSCertificate of Analysis
Use Restrictions
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.Storage Conditions
Store at –20°C.
What's in the box
| Item | Part # | Choose a size |
|---|---|---|
|
GF-AFC Substrate |
G608B | 2 × 50μl |
|
bis-AAF-R110 Substrate |
G609B | 2 × 50μl |
|
Assay Buffer |
G610B | 2 × 50ml |
SDS
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Use Restrictions
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.Storage Conditions
Store at –20°C.
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