CellTiter 96® AQ_ueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay (MTS)

Il saggio di proliferazione cellulare non radioattivo CellTiter 96® _AQueous è un metodo colorimetrico omogeneo per determinare il numero di cellule vitali in saggi di proliferazione, citotossicità o chemiosensibilità. Il saggio è composto da soluzioni di un nuovo composto di tetrazolio [3-(4,5-dimetiltiazolo-2-il)-5-(3-carbossimetossifenile)-2-(4-solfofenile)-2H-tetrazolio, sale interno; MTS] e da un reagente di accoppiamento degli elettroni (fenazina metosolfato) PMS. L'MTS viene biorientato dalle cellule in un prodotto formazan, solubile nel terreno di coltura. L'assorbanza del prodotto formazan a 490 nm può essere misurata direttamente da piastre di saggio a 96 pozzetti senza ulteriori elaborazioni. La conversione dell'MTS nel prodotto formazan solubile in acqua è realizzata dagli enzimi deidrogenasi presenti nelle cellule metabolicamente attive. La quantità di prodotto formazan, misurata dalla quantità di assorbanza a 490 nm, è direttamente proporzionale al numero di cellule vive in coltura.

Se attualmente si utilizza un saggio di incorporazione di^[3H]-timidina, l'aggiunta della soluzione combinata MTS/PMS può essere sostituita da^[3H]-timidina nel momento del saggio in cui viene solitamente aggiunto l'impulso di timidina radioattiva. I dati dei biotest di proliferazione che confrontano il saggio CellTiter 96® _AQueous Assay e l'incorporazione di^[3H]-timidina mostrano risultati simili. Ciò è in accordo con studi analoghi sull'incorporazione della radioattività eseguiti utilizzando il saggio originale CellTiter 96®.

Caratteristiche e vantaggi

È un test facile da usare: è sufficiente combinare le soluzioni di MTS e PMS fornite, aggiungerle alle cellule, incubare e leggere l'assorbanza. Il test è rapido e può essere eseguito in una piastra a 96 pozzetti senza lavaggi o raccolta di cellule. L'eliminazione delle fasi di solubilizzazione, poiché il prodotto formazan dell'MTS è solubile nel terreno di coltura, consente di risparmiare tempo. Essendo un test non radioattivo, non è necessario alcun cocktail di scintillazione o smaltimento di rifiuti radioattivi (a differenza della^[3H]-timidina) e la flessibilità è assicurata. A differenza del saggio MTT, le piastre possono essere lette e rimesse in incubatore per un ulteriore sviluppo del colore, per un flusso di lavoro flessibile.