Il sistema TUNEL colorimetrico DeadEnd™ fornisce i reagenti per eseguire l'etichettatura dUTP nick-end mediata da deossinucleotidil transferasi terminale (TUNEL) del DNA nucleare frammentato per valutare l'apoptosi in situ a livello di singola cellula in sezioni di tessuto o cellule coltivate. Il nucleotide biotinilato viene incorporato alle estremità 3´-OH del DNA frammentato utilizzando la deossinucleotidil transferasi terminale (TdT). La streptavidina marcata con perossidasi di rafano (Streptavidin HRP) si lega quindi a questi nucleotidi biotinilati, che vengono rilevati con il cromogeno stabile, la diaminobenzidina (DAB). Con questa procedura, i nuclei apoptotici vengono colorati di marrone scuro e visualizzati al microscopio ottico.
Caratteristiche e vantaggi
- Rileva l'apoptosi in sezioni di tessuto spesse o valuta la morfologia cellulare.
- Il test include il reagente DAB per la rilevazione del colore e coprioggetti in plastica che semplificano la manipolazione dei campioni.
- Le applicazioni comprovate includono sezioni Vibratome® di tessuto neuronale, cellule Jurkat, cellule HL-60.
Nota: Il protocollo per il test TUNEL DeadEnd™ raccomanda un trattamento opzionale con DNasi I dei campioni come controllo positivo per rilevare la frammentazione del DNA. Per generare il controllo positivo si può usare la DNasi RQ1 RNase-Free (Cat.# M6101), disponibile separatamente.