ApoTox-Glo™ Triplex Assay
Assess Viability, Cytotoxicity and Apoptosis in One Assay
- Easy to implement with an "add-mix-measure" protocol
- Normalize data with a built-in control
- Flexible and easily automated
Catalog Number:
Size
Catalog Number: G6320
Catalog Number: G6321
Tre test efficaci in un unico prodotto
Il test ApoTox-Glo™ Triplex combina tre chimiche di analisi per valutare facilmente la vitalità, la citotossicità e gli eventi di apoptosi nello stesso pozzetto di analisi basato sulle cellule. In primo luogo, la vitalità e la citotossicità sono determinate misurando due biomarcatori di proteasi differenziali simultaneamente con l'aggiunta di un singolo reagente non litico contenente due substrati peptidici. L'attività della proteasi a cellule vive è limitata alle cellule vitali intatte e viene misurata utilizzando un substrato peptidico fluorogenico permeabile alle cellule (GF-AFC Substrate). Il substrato entra nelle cellule intatte, dove viene scisso per generare un segnale fluorescente proporzionale al numero di cellule vive. Questo marcatore di attività proteasica a cellule vive diventa inattivo quando si perde l'integrità della membrana e si disperde nel terreno di coltura circostante.
Un secondo substrato peptidico fluorogenico, permeabile alle cellule (bis-AAF-R110 Substrate), viene utilizzato contemporaneamente per misurare l'attività proteasica delle cellule morte, rilasciata da cellule che hanno perso l'integrità della membrana. Si ottengono così misure raziometriche, inversamente correlate, della vitalità cellulare e della citotossicità. Il rapporto tra cellule vitali e cellule morte è indipendente dal numero di cellule e, pertanto, può essere utilizzato per normalizzare i dati. Viene aggiunto un secondo reagente contenente il substrato luminogenico DEVD-peptide per la caspasi-3/7 e la luciferasi termostabile ricombinante Ultra-Glo™. La scissione della caspasi-3/7 del substrato rilascia luciferina, che è un substrato per la luciferasi e genera luce. La luce emessa, misurata con un luminometro, è correlata all'attivazione della caspasi-3/7 come indicatore chiave dell'apoptosi.
La confezione G6320 contiene reagenti sufficienti per 100 dosaggi in formato 96 pozzetti o 400 dosaggi in formato 384 pozzetti. Il codice G6321 contiene reagenti sufficienti per 500 dosaggi in una piastra a 96 pozzetti o 2.000 dosaggi in un formato a 384 pozzetti.
Misurare la vitalità, la citotossicità e l'apoptosi nello stesso pozzetto del campione
Ionomycin treatment of Jurkat cells for 6 hours results in dose-dependent decrease in viability and increase in cytotoxicity with no caspase-3/7 activation, consistent with primary necrosis.
ApoTox-Glo™ Triplex Assay with suspension Jurkat cells treated with staurosporine. Staurosporine treatment for 6 hours results in a dose-dependent decrease in viability and increase in cytotoxicity with an increase in caspase-3/7 activity consistent with apoptosis.
Camptothecin treatment of Jurkat cells for 48 hours results in dose-dependent decrease in viability, no cytotoxicity and increase in caspase-3/7 activity, consistent with cell-cycle arrest and early-phase apoptosis.
Protocols
Complete Protocol
Quick Protocols
Specifications
Catalog Number:
What's in the box
| Item | Part # | Choose a size |
|---|---|---|
|
GF-AFC Substrate |
G608A | 1 × 10μl |
|
bis-AAF-R110 Substrate |
G609A | 1 × 10μl |
|
Assay Buffer |
G610A | 1 × 10ml |
|
Caspase-Glo® 3/7 Buffer |
G810A | 1 × 10ml |
|
Caspase-Glo® 3/7 Substrate |
G811A | 1 × 1 bottle |
SDS
Search for SDSCertificate of Analysis
Use Restrictions
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.Storage Conditions
What's in the box
| Item | Part # | Choose a size |
|---|---|---|
|
GF-AFC Substrate |
G608B | 1 × 50μl |
|
bis-AAF-R110 Substrate |
G609B | 1 × 50μl |
|
Assay Buffer |
G610A | 2 × 10ml |
|
Caspase-Glo® 3/7 Buffer |
G810A | 5 × 10ml |
|
Caspase-Glo® 3/7 Substrate |
G811A | 5 × 1 bottle |
SDS
Search for SDSCertificate of Analysis
Use Restrictions
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.Storage Conditions
Resources
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