Saggi di apoptosi
Un saggio di apoptosi rileva e quantifica gli eventi cellulari associati alla morte cellulare programmata, tra cui l'attivazione delle caspasi, l'esposizione della superficie cellulare alla fosfatidilserina (PS) e la frammentazione del DNA.
I test di apoptosi Promega includono i test Caspase-Glo® luminescenti, che rilevano l'attività delle caspasi coinvolte nelle vie dell'apoptosi intrinseca o estrinseca. I test Caspase-Glo® 3/7, 8 e 9 sono i più sensibili disponibili per le caspasi.
Il RealTime-Glo® Annexin V Apoptosis Assay è un saggio luminescente che rileva l'esposizione alla fosfatidilserina (PS) e monitora continuamente l'apoptosi in tempo reale in un pozzetto di coltura cellulare.
Offriamo anche test TUNEL, anticorpi per l'apoptosi, inibitori e altri marcatori per l'apoptosi.
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Fondamenti del saggio di apoptosi
L'apoptosi, o morte cellulare programmata, elimina le cellule danneggiate, infette o ridondanti. L'apoptosi è associata a distinti cambiamenti morfologici, tra cui il restringimento delle cellule, la condensazione della cromatina, la perdita dell'integrità della membrana nucleare, il sanguinamento della membrana plasmatica e la formazione di corpi apoptotici. Altri tipi di morte cellulare sono la necrosi, che si verifica dopo una lesione cellulare ed è meno regolata dell'apoptosi. Capire se la morte cellulare è il risultato dell'apoptosi è importante per comprendere le vie di sviluppo, il meccanismo d'azione dei farmaci a piccola e grande molecola (biologici) e le funzioni correlate del sistema immunitario.
I saggi di apoptosi rilevano tipicamente eventi biochimici e cellulari che indicano l'attivazione di una via apoptotica. L'attivazione di un effettore (ad esempio, la caspasi-3) porta a eventi apoptotici comuni come l'esposizione della fosfatidilserina sulla superficie esterna della membrana plasmatica (tipicamente misurata attraverso il legame con l'annessina V), la scissione degli enzimi omeostatici e di riparazione cellulari (ad esempio, la poli [ADP-ribosio] polimerasi [PARP] misurata con tecniche anticorpali) e la frammentazione del DNA internucleosomiale (tipicamente misurata attraverso i saggi TUNEL). L'attivazione della caspasi-3 è considerata un impegno completo per la morte cellulare apoptotica. Gli eventi esatti dipendono dalla via apoptotica attivata.
In genere, è necessario più di un metodo per confermare che la morte cellulare avviene tramite apoptosi. I marcatori dell'apoptosi, come l'attività della caspasi, possono essere espressi solo transitoriamente. Pertanto, per determinare se l'apoptosi è il meccanismo primario di morte cellulare, è fondamentale comprendere la cinetica del processo di morte cellulare nel sistema modello. I saggi in tempo reale su cellule vive monitorano gli eventi apoptotici nel tempo. Per valutare la tempistica degli eventi all'interno della via apoptotica si possono utilizzare anche metodi multipli.