P450-Glo™ CYP2B6 Assay and Screening Systems

Il saggio P450-Glo™ CYP2B6 fornisce un metodo omogeneo e luminescente per misurare l'attività del citocromo P450 CYP2B6. Il test impiega substrati luminogenici P450 che sono derivati della luciferina di coleottero, un substrato per gli enzimi luciferasi. I derivati non sono substrati per la luciferasi, ma vengono convertiti dalle P450 in luciferina, che a sua volta reagisce con la luciferasi per produrre luce direttamente proporzionale all'attività della P450.

Questo saggio luminescente presenta una sensibilità straordinaria, bassi segnali di fondo e un'ampia gamma dinamica. Genera un segnale luminescente di tipo "glow", prodotto utilizzando luciferine derivatizzate come substrati del P450 e una luciferasi ricombinante stabilizzata (Ultra-Glo™ Luciferase) accoppiata a un sistema tampone proprietario. L'emivita dell'emissione luminescente è superiore a due ore, eliminando la necessità di luminometri con iniettori e consentendo l'elaborazione di piastre in batch. Il formato luminescente elimina anche la necessità di analisi lunghe come l'HPLC.

I substrati a base di luciferina sono prontamente assorbiti dalle cellule e rapidamente convertiti in luciferina all'interno della cellula, il che riduce il tempo di incubazione richiesto (in genere 30–60 minuti). Altri vantaggi del P450-Glo™ CYP2B6 Assay includono una formulazione che riduce al minimo l'incidenza di falsi positivi dovuti all'inibizione della luciferasi da parte degli analiti durante lo screening degli inibitori del citocromo P450. I valori di Z´ superiori a 0,8 si ottengono nei formati di piastra a 96 o 384 pozzetti e conferiscono risultati altamente predittivi.

Il sistema di screening P450-Glo™ CYP2B6 fornisce un set completo di reagenti per l'esecuzione di saggi luminescenti del citocromo P450. Il sistema comprende una preparazione di membrana contenente l'enzima ricombinante del citocromo P450 umano, un substrato luminogenico del citocromo P450 appropriato per l'enzima, un sistema di rigenerazione NADPH, un tampone di reazione, un reagente per la rivelazione della luciferina e acqua priva di luciferina. Le membrane sono preparate da cellule di insetto infettate da baculovirus e contengono citocromo P450 umano, P450 reduttasi e citocromo b5. Il sistema di screening P450-Glo™ contiene anche una frazione di membrana priva di attività del citocromo P450 come controllo negativo. I saggi sono ideali per testare gli effetti di farmaci e nuove entità chimiche sulle attività enzimatiche del citocromo P450.